蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。

 

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

 

（1）從－20℃將1mg/ml BSA取出，室溫融化后備用。

（2）將1.5ml離心管取18個，3個一組，分別標(biāo)記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。

（3）根據(jù)下面的表格將各種試劑加入到各管中。

（4）混勻后，室溫放置2分鐘，在生物分光光度計(jì)（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。

 

2、樣品蛋白含量的檢測

 

（1）取1.5ml離心管足夠多，將1ml4℃儲存的考馬斯亮藍(lán)溶液分別加入到每個離心管中，在室溫下放置30分鐘以后，就能夠被用來對蛋白進(jìn)行檢測。

（2）將100ul 0.15mol/L NaCl溶液加入到取出的一管考馬斯亮藍(lán)溶液中，混勻放置2min中，就能夠作為空白樣品，在比色杯中倒入空白樣品，在做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的程序下按blank對空白樣品進(jìn)行檢測。

（3）將空白樣品棄掉，比色杯使用無水乙醇清洗2次（每次0.5mL），再將其使用無菌水洗一次。

（4）將95ul 0.15mol/L NaCl加入到取出的一管考馬斯亮藍(lán)溶液中，混勻后靜置2min，往扣干的比色杯中倒入按sample鍵對樣品進(jìn)行檢測。

 

 

蛋白印跡儀被廣泛應(yīng)用于臨床診斷領(lǐng)域，如篩選和確診引起感染性疾病的不同致病源（如病毒或細(xì)菌），以及過敏原鑒定。全自動蛋白印跡儀能將蛋白印跡處理中的所有關(guān)鍵步驟自動化，尤其是繁瑣的清洗和孵育步驟。